DT3C是一種重組蛋白，由一個沒有受體結(jié)合域的白喉毒素diphtheria toxin (DT)和鏈球菌蛋白G（Streptococcus protein G）的C1、C2、C3（3C）結(jié)構(gòu)域構(gòu)成 ，主要用于體外檢測靶細(xì)胞對單克隆抗體的內(nèi)化效率。
DT3C主要應(yīng)用領(lǐng)域：
- 抗體內(nèi)化效率的體外評估
- ADC藥物研究
- 抗體篩選和評估
DT3C的技術(shù)優(yōu)勢：
相比于目前常見的抗體內(nèi)化效率檢測技術(shù)（如酸性緩沖液洗脫法、mAb-ZAP法、pHrodo技術(shù)等），DT3C重組蛋白測定抗體內(nèi)化具有操作簡單、精準(zhǔn)量化的特點，具有廣闊的應(yīng)用前景。
- 制備簡單：僅需在室溫下孵育30分鐘即可形成mAb-DT3C偶聯(lián)物；
- 多物種適用性：可與來自不同物種的任何IgG結(jié)合，形成mAb-DT3C偶聯(lián)物；
- 快速評估：使用流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡等技術(shù)，可以快速且準(zhǔn)確地檢測單克隆抗體（mAb）在細(xì)胞表面的內(nèi)化效率；
- 內(nèi)化效率高：抗體內(nèi)化效率明顯高于Mab-ZAP
可體外檢測ADC抗體內(nèi)化效率
抗體內(nèi)化效率明顯高于Mab-ZAP
參考文獻：M. Yamaguchi et al. Biochemical and Biophysical Research Communications 454 (2014) 600–603.
華美生物 DT3C重組蛋白：
華美生物用大腸桿菌表達系統(tǒng)所表達的DT3C重組蛋白，經(jīng)SDS-PAGE驗證，SEC-HPLC檢測，純度高于90%；
我們用不同濃度的DT3C蛋白與CCR8抗體37℃孵育30min后加入培養(yǎng)板培養(yǎng)48h；EC50分別為0.5795-1.400 μg/mL、0.5608-1.318 μg/mL。
CT26/Human CCR8 Stable Cell Line：5000cells/孔；
BMK-1/2：10μg/mL
如何用DT3C檢測抗體內(nèi)化效率？
實驗步驟：
- ① 細(xì)胞培養(yǎng)：準(zhǔn)備對數(shù)培養(yǎng)期細(xì)胞，對細(xì)胞計數(shù)并鋪板；
- ② DT3C與抗體混合液的配置：在37°C將mAb和DT3C孵育30分鐘，形成mAb-DT3C偶聯(lián)物；
- ③ 細(xì)胞處理：將mAb-DT3C偶聯(lián)物添加到細(xì)胞培養(yǎng)基中，使其與細(xì)胞相互作用；
- ④ 內(nèi)化效率評估：使用MTT或其他方法檢測mAb在細(xì)胞表面的內(nèi)化效率。
