外泌體提取試劑盒
外泌體（exosomes）是一種能被機體內大多數細胞分泌的直徑大約為 30 ~ 150 nm 的具有脂質雙層膜的微小膜泡。它廣泛存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號分子，形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統，影響細胞的生理狀態并與多種疾病的發生與進程密切相關。
華美生物外泌體提取試劑盒提供了一種簡單可靠的方法可從細胞培養上清液，血清，血漿，乳液，尿液，唾液、酵母、植物中提取完整的外泌體。本產品提取的外泌體囊泡適用于下游的電鏡分析、NTA分析、納米流式（NanoFCM）分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應用。
方法對比
研究外泌體內涵成分的前提是對其進行高質量的提取，由于外泌體粒徑較小且與多種其他生物分子混合在一起，導致其分離純化困難，阻礙了對其的進一步研究。
近年來，研究人員根據外泌體理化性質研發了多種分離純化方法：常用的有超速離心法、密度梯度超速離心法、超濾法、多聚物沉淀法（PEG）、免疫磁珠法、試劑盒分離法等。
而對于外泌體的分離，首先要關注外泌體的提取質量，包括純度、囊泡狀態、得率及重復性等方面的評估，然后才是技術路線的選擇。
| 純化方法 |
外囊泡純度 |
囊泡狀態 |
可操作性 |
回收量 |
重復性 |
設備要求 |
| 超速離心法 |
★★ |
★★ |
★★★ |
★★ |
★ |
超速離心機 |
| 密度梯度離心法 |
★★★★ |
★★ |
★ |
★ |
★ |
超速離心機 |
| 超濾法 |
★★ |
★★★ |
★★★ |
★★ |
★★ |
普通離心機 |
| 多聚物沉淀法 |
★ |
★★ |
★★★★ |
★★★★ |
★★ |
普通離心機 |
抗體親和純化
（磁珠） |
★★★ |
★ |
★★★ |
★★ |
★★★★ |
普通離心機+磁鐵架 |
華美生物
外泌體純化法 |
★★★ |
★★★ |
★★★ |
★★★ |
★★★★ |
普通離心機
(配套濃縮管) |
1. 超速離心法是最常用的外泌體純化手段，目前已發表文獻引用最多的方法，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。
優點：無需特殊試劑，操作簡便，適合大批量樣本。
缺點：耗時耗力，純度相對較低，回收率不穩定，重復離心會一定程度損傷外泌體，設備要求高。
2. 密度梯度超速離心法是在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層，是一種區帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/mL的密度范圍富集。
優點：純度相對較高，適合大批量樣本。
缺點：步驟繁瑣，耗時，回收率不穩定，重復離心會一定程度損傷外泌體，設備要求高。
3. 超濾法是將溶劑及小分子物質過濾到膜的另一側，而將相對大分子物質截留在超濾膜上，以達到分離的目的。
優點：簡單高效，不影響外泌體的完整性。
缺點：外泌體可能會阻塞過濾孔，導致膜的壽命減短，分離效率和純度較低。此外，截留在膜上的外泌體間也會發生粘附，導致產量降低。
4. 多聚物沉淀法根據化合物與外泌體的理化特性，利用共沉淀或者反向篩選的方式對外泌體進行分離純化。
優點：操作簡單、耗時短、無設備限制。
缺點：純度較低，存在假陽性（雜蛋白較多或一些難以去除的聚合物），機械力或化學添加物對外泌體產生破壞，存在于分離物中的聚合物也可能會干擾下游分析等。
5. 抗體親和（磁珠）法利用包被單克隆抗體的磁珠結合外泌體，外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。
優點：純度較高，特異性和重復性好、操作簡便、無設備限制。
缺點：效率和回收率較低，僅能捕獲表達特定抗原的目標外泌體，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，囊泡完整性影響較大。
綜上所述，現有技術的方法提取到的外泌體，缺陷在于：收率較低，耗時長、純度不高，外泌體囊泡不完整等。
鑒于上述問題，武漢華美生物工程有限公司匠心研發的外泌體提取試劑盒通過蛋白親和的方式分離外泌體，無需超速離心即可實現高效率地從各種類型樣本中提取高純度、囊泡結構完整的外泌體，具有簡便、穩定、易操作的優點。
產品優勢
● 適用于各種樣品類型
CUSABIO外泌體提取試劑盒提供了一種簡單可靠的方法，可從細胞培養上清液，血清，血漿，乳液，尿液，唾液、酵母、植物中提取完整的外泌體。
- Exosomes extracted from plasma
- Exosomes extracted from serum
- Exosomes extracted from urine
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from Breast Milk
- Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from Hela cells
Exosomes extracted from serum
Exosomes extracted from plasma
Exosomes extracted from Breast Milk
Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from urine
Exosomes extracted from pichia pastoris
Exosomes extracted from kluyveromyces lactis
● 適用于各種細胞上清液中外泌體的分離提取
CUSABIO外泌體提取試劑盒可用于從各種細胞的上清液中分離外泌體，例如A375, Hela, HEPG2, MG63, Ntera-2, PC-3, Raji, U87, U251等。
- Exosomes extracted from A375 cells,
- A375 cell Lysate
- Exosomes extracted from HEPG2 cells
- Exosomes extracted from PC-3 cells
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from U87 cells
- Hela cell Lysate
- Exosomes extracted from MG63 cells
- Exosomes extracted from Ntera-2 cells
- MG63 cell Lysate
- Exosomes extracted from Raji cells
- Exosomes extracted from U251 cells
- Raji cell Lysate
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from Hela cells
- Exosomes extracted from urine
● 所提取的外泌體囊泡結構完整，呈球形或碟形，顆粒均勻
Exosomes extracted from Breast Milk
Exosomes extracted from urine
Exosomes extracted from saliva
Exosomes extracted from pichia pastoris
● 高產量，單次提取，可獲得3*10^11個外泌體囊泡
CUSABIO (CSB-EI0102, CSB-EI0110)
粒徑大?。?9.19 nm
顆粒濃度： 3.08*1011 個 /mL
● 通過對比，華美試劑盒所提取的外泌體整體優于其他三家知名品牌試劑盒，可與超速離心法相媲美
- CSB-EI0102(2T), CSB-EI0110(10T)
- Company A
- Company B
- Company C
- Ultracentrifugation
- Hela Cell Lysate
產品列表
針對上述產品，如果您有更多的需求或疑問，請聯系在線客服，我們會隨時為您提供服務。
客戶評價
實驗應用：提取尿液EV，并檢測所含RNA,主要是miRNA
樣品信息：晨尿，隨機尿
產品評價：尿液所含的細胞外囊泡（EV）可能包含了膀胱癌細胞主動分泌的miRNA,通過檢測EV中特定miRNA峰度的變化，可能識別早期癌癥。Cusabio外泌體提取試劑盒分離尿液中的EV；一部分EV提取RNA、反轉錄、qPCR檢測內參靶標；另一部分EV簡單處理后直接反轉錄、qPCR檢測。CUSABIO試劑盒提取結果不錯。
實驗應用：qPCR
樣品信息：細胞上清
產品評價：提取外泌體效果還不錯！
實驗應用：TEM
樣品信息：細胞上清液-濃縮5倍-500微升-400ul洗脫-又超濾濃縮至20ul
產品評價：能清楚看到外泌體，完整、清晰，但是由于不清楚1T可以提取最多50ml細胞上清這件事，導致使用太少細胞上清液，提取的外泌體太少。
實驗應用：WB
樣品信息：腦組織
產品評價：所提取外泌體進行了WB檢測標志蛋白CD9，電鏡未做，但內參蛋白發光時未見，原因未知。但在提取過程時確實非常方便，不需要超速離心。值得推薦~
實驗應用：WB
樣品信息：細胞上清
產品評價：提取到目標蛋白分子，WB條帶也比較清晰~
實驗應用：qPCR
樣品信息：細胞上清
產品評價：提取外泌體效果還不錯！
實驗應用：WB
樣品信息：胰腺癌細胞上清外泌體提取
產品評價：所提取外泌體較為純正，步驟簡單，實驗結果可靠。目前就是從提取的外泌體里面發現有我的目標分子。
實驗應用：qRT-PCR驗證lncRNA的存在及表達
樣品信息：25ml MHCC97H肝癌細胞的培養基上清
產品評價：結果所示為 試劑盒所提取外泌體的lncRNA擴增曲線以及擴增的CT值。
總體來說，提取外泌體總共需要花費時間并不多，過程較為簡單，只是有一處稍有疑惑。濃縮的0.75ml的上清在進行0.45um膜進行過濾時，量太少不太好進行過濾，我是往里打空氣，但總會有損失。這一步驟不過濾可否。
貴公司試劑盒regentA為乳狀物，上層為上清，很難混勻，吸取的時候乳狀液較難吸上。望這一步驟說明進行解釋說明。
實驗應用：WB/電鏡
樣品信息：血清，1mL
產品評價：WB條帶特異，電鏡結果顯示結構完成，有典型的外泌體形狀呈現，結果比預期好不少！值得推薦~
實驗應用：電鏡/NTA
樣品信息：中段晨尿，15ml
產品評價：所提取的外泌體結構完成，呈典型的茶托裝，平均粒徑69nm，濃度達到10^10 Particles/mL以上，結果良好
常見問題
1、如何保存純化獲得的外泌體囊泡？
答：短時間內保存于4℃，長時間保存需要放置于-80℃（建議分裝后保存、避免反復凍融）
2、如何獲得無外泌體血清培養細胞？
答：a、將細胞培養用的血清通過超速離心10h以去除血清中外泌體（無菌操作）；
b、可選擇無血清培養基進行細胞培養；
c、可選擇去外泌體血清進行細胞培養。
3、如何確認所提取到的是外泌體？
答：可以通過特定標志物的WB驗證，電鏡、粒徑（納米流式、NTA）等方式來確認。
4、與超速離心相比，我們的優點是什么？
答：與超速離心相比，可以簡便的、穩定的、高重復性的實現外泌體的回收，且沒有儀器設備的限制。
研究發展
外泌體爆炸性研究活動已經慢慢演變為分子醫學的快速發展。外泌體在臨床醫學中有十分光明的應用前景，主要是因為它們含有豐富的生物標志物，可用于監測臨床狀態、診斷疾病、治療反應、疾病進展等。重要且有影響力外泌體研究領域會隨著高效率的外泌體分離技術的發展而發展。
外泌體可作為生物標志物用于疾病的診斷，也推動了以外泌體為靶標的治療方法研究或將外泌體本身用作治療工具的研究。將外泌體用作治療工具的臨床研究正在開展之中，其目的是研究患者自身MSC分泌外泌體或健康捐贈者體內外泌體用于治療的安全性和有效性。這個趨勢下，外泌體用作藥物輸送系統作為基因治療的潛在載體有可能變得更加普遍。外泌體在癌癥中同時發揮免疫激活和免疫抑制功能，外泌體腫瘤免疫療法有望誕生抗癌疫苗。
外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統的技術突破，理論上能夠從外泌體中檢測到DNA序列變異、RNA的表達變化、蛋白質變化等。要將其用于臨床治療，外泌體的大規模工業化生產還面臨很大的挑戰。首先，對外泌體的具體合成機制、功能了解并不是非常詳細。其次，存在外泌體分離技術、分離量、及檢測技術的挑戰，外泌體在腫瘤學中的應用還需要加強和深入研究。然而，雖然當前外泌體生物學仍然不成熟，但越來越多的興趣和資金投入必將加速外泌體基礎研究進展和臨床轉化。
